(一)哮喘衣原体的阐述
哮喘衣原体（，Mp）是一种常见的病原微生物，主要造成人类呼吸道感染，尤其以儿童和青年为主。Mp是儿童社区获得性脑炎（-，CAP）的重要病支原体），可占CAP的10%-30%。
据WHO公布的数据显示，全球每年约有1.56亿例儿童临床性肾炎新发作，其中95％以上发生在发展中国家。在2015年世界上就有名5岁以下儿童死于猩红热。其中由麻疹原体引发的感染数目排第二，仅次于百日咳杆菌。针对Mp感染及其哮喘等造成误诊、漏诊及过度确诊在临床上亟需解决。
(二)儿童Mp感染误诊、漏诊及过度确诊的诱因
1.临床表现不典型、缺乏特异性，不同年纪阶段的临床表现各不相同，尤其在婴幼儿。
2.以肺外表现为首发者常常被漏诊，混和感染患者Mp作为病原也易被忽略。
3.部份MPP患者呼吸系统病症轻，甚至无呼吸道病症，影像学异常改变滞后，因而未做MP病原学检测而造成漏诊。尚需注意有些诊断为MPP的患者腹部CT发觉的异常在胸X线片上无法显示下来。
4.大环内脂类抑菌抗生素耐药的Mp感染者，经验性给与大环内脂类效果不佳，届时假如轻易除外Mp感染就有可能造成漏诊。
5.实验室确诊偏差致临床误诊、漏诊和过诊：
1)血浆学测量IgM抗原偏差，Mp抗原检查应当定量而非定性，单纯定性容易过多确诊Mp感染。据悉，一项调查急性Q热脑炎流行率的研究表明，Q热脑炎者可因为交叉反应导致Mp－IgM阴性，容易被误诊为MPP。
2)PCR检查偏差，尽管核苷酸扩增技术有特异性强、灵敏和快速的优点，但也不可忽视样品中存在PCR抑制物、试剂制备和反应条件不理想、靶DNA提取效率低下等导致假阳性的情况。感染Mp后可不出现病症但持续携带，这会导致假阴性的结果。核苷酸扩增DNA检查并不能分辨携带者与感染者、急性感染者与恢复期病人，单纯依赖PCR检查有可能造成MP感染的过度确诊。
(三)国际上Mp感染确诊策略
1.国外Mp的确诊策略
随着Mp感染危重和难治病例的不断增多，初期、快速、准确确诊是临床对实验室确诊方式学提出的急迫需求，而实验室结果的合理剖析也是临床恰当治疗的重要前提；目前，Mp的测量方式主要分为病原学检查和血浆学测量两大类，按照《中国儿童哮喘衣原体感染实验室确诊规范和临床实践专家共识（2019年）》提出建议，Mp感染的实验室确诊，抗原检查优先于抗体检查，如能获取急性期与恢复期双份血浆，抗原测量的价值更大。
《儿童哮喘原体呼吸道感染实验室确诊中国专家共识》的感染实验室确诊流程图如下：
图1Mp呼吸道感染实验室确诊流程图
在日本长庚诊所的儿童哮喘原体脑炎的合理分阶段医治流程图中，其Mp感染的实验室确诊策略为：
1)血浆转化（IgM由阳性转化为阴性）；
2)间隔两周内，抗原效价降低（IgM降低2倍或IgG降低4倍）；
3)PCR阴性。
图2：儿童哮喘原体麻疹的合理分阶段医治
2.美国Mp的确诊策略
在德国慕尼黑儿童诊所的研究中，在的检查过程中，Mp-IgM和PCR联检可使其阴性检查率高达99%。
图3：儿童哮喘原体麻疹的联合检查
综上所述，国际上Mp感染的血浆学以血浆学联合病原学测量为确诊策略。
(四)Mp抗原免疫应答的抗体选择策略
1.Mp的血浆抗原
人体感染Mp后能形成IgM、IgA、IgG类抗原：
IgM：感染一周内下降，2-3周达到高峰，4周后开始回升，2-3月降至最低，可作为近日感染的确诊指标；
IgA：感染初期迅速上升，7-14天至峰值水平，变化与IgM一致，但反弹更早；
IgG：感染后14天左右出现，在第5周达到高峰，可常年维持细胞膜抗原，提示既往感染。
2.Mp的血浆抗原的免疫应答反应
在美国的圣艾蒂安学院的微生物实验室的研究中，Mp可导致多种免疫应答，通过试验来确定在MP病人的血浆中形成免疫应答的主要蛋白，从结果中可以看出，病人血浆中可辨识的MP蛋白可多达30多种，其中主要以、、、、92kDa、84kDa、66kDa、55kDa、43kDa等。
图4：麻疹衣原体的免疫应答反应
1)Mp-IgM形成的免疫应答
Mp病人的血浆中，在感染过程中的第二周直到第三周，IgM所辨识的蛋白主要有、、、84kDa、56kDa等多个蛋白位点，直至第4-5周其所导致的条带略微调低。
2)Mp-IgG形成的免疫应答
Mp病人的血浆中，在感染过程所辨识的蛋白变化很大，但从感染其至整个过程中持续造成IgG免疫应答的主要蛋白为。
图5：Mp-IgM和Mp-IgG免疫应答过程中所辨识的蛋白
图5：Mp-IgM和Mp-IgG免疫应答过程中所辨识的蛋白
图5：Mp-IgM和Mp-IgG免疫应答过程中所辨识的蛋白
3.Mp的血浆抗原的抗体策略
用于抗原检测试剂的Mp抗体选择十分重要，他决定了测量的敏感度和特异度，按照上述所列的抗原及抗原参与的免疫应答情况可知，目前主要的抗体为全菌体抗体和P1粘附蛋白。
1)关于全菌体抗体
Mp全菌体裂解物（全菌体抗体）：
包括细胞膜的糖脂、蛋白质等成份；囊括抗原位点齐全，可用于Mp-IgM、Mp-IgG抗原检查。
图6：麻疹原体蛋白的结构示意图
2)关于Mp-P1蛋白
Mp-P1蛋白能剌激机体形成较强烈的免疫应答，是Mp确诊的重要抗体；其中P1基因包含4881个碱基，可编码1627个多肽，其中包含了21个UGA密码子，在编码的过程中，UGA是中止密码子。因而重组蛋白难以获取P1蛋白的全长片断，一般以N端（P1-N1）和C端（P1-C1）区域为粘附蛋白的免疫区。
N端（P1-N1）分子量：13.9kDa；
C端（P1-C1）分子量：~39.7kDa；
在免疫印迹过程中发觉，二者均能与单抗反应，病人血浆只辨识重组纯化C端（P1-C1）。
图7：P1的基因组和P1不同片断反应
图7：P1的基因组和P1不同片断反应
在重组抒发的过程中，不同的提取方式获取的蛋白含量不同；如右图：
１：大肠弧菌的空载体
２：大肠球菌诱导抒发重组P1的裂解物；
３：超声和离心后细胞裂解物的沉淀部份；
４：超声和离心后细胞裂解物的碱液；
５：色谱提纯；
６：凝胶过滤和色谱法提纯。
由此可知，其蛋白的含量与提纯方法有关，色谱法可获取较高含量的P1重组蛋白。
图8：不同提纯方式的P1蛋白含量情况
在同等的含量的蛋白浓度的反应过程中发觉，Mp-IgG与P1蛋白的吸光值低于Mp-IgM，由此可知，P1蛋白与Mp-IgG的免疫应答反应性更高，更适用于于Mp-IgG检查。
图9：P1蛋白与Mp-IgG和Mp-IgM的反应
在英国莱顿学院医学中心的研究中，比较了12种测量Mp-IgM和Mp-IgG抗原的测量试剂，结果表明，使用全菌体抗体的、和CFT的确诊性能比较高，使用含有P1抗体的确诊Mp-IgM的性能不如含全菌体抗体，其中使用全菌体抗体的CFT试剂测量Mp-IgM的确切度最高，其中ROC曲线也为最高。
图10：不同抗体在Mp-IgG、Mp-IgM中的应用对比
图10：不同抗体在Mp-IgG、Mp-IgM中的应用对比
(五)总结
综上所述，Mp是CAP的常见病支原体，初期、快速、准确确诊是解决Mp感染的临床学若干问题的关键细胞膜抗原，合理的应用确诊策略和选择合适的抗体策略是提升Mp感染实验室确诊的必要条件，也是结合临床恰当治疗的重要前提。