抗生素与受体互相作用研究在抗生素研制过程中发挥着十分重要的作用细胞膜色谱,其研究方式的方便程度以及确切度直接影响抗生素研制的效率。通常研究抗生素受体的互相作用均采用放射配基结合剖析法和亲和色谱法,但因放射配基结合剖析法操作复杂,须要制备特定的放射性配基,使应用遭到一定的限制;而一般的亲和色谱法须要制备一定数目及一定含量的受体,难度较大,且可能会影响受体对抗生素的选择性。
1996年,重庆交通学院贺浪冲院士提出细胞膜色谱法(cell,CMC),经过20年的不断发展,CMC法已逐渐成为研究抗生素与膜受体亲和作用的有力工具之一。CMC系统将完整的细胞膜包覆于硅胶表面,在仿生理条件下制备成色谱柱进行成份受体互相作用研究,可以快速筛选草药复杂体系中的活性成份,并确切估算出其与受体间的配位亲和常数。
日前,重庆交通学院王嗣岑院长等人在《药学进展》杂志发表文章“细胞膜色谱法用于抗生素与受体互相作用研究进展”,详尽介绍了细胞膜色谱法的前世此生及相关应用。
传统的CMC方式经历了2次“更新换代”:首先,原CMC模型中分离鉴定采用离线方法完成,即通过筛选发觉在特定细胞膜固定相上有保留的草药部位,采用人工方式将保留组分接收并进行下一步分离及鉴别。十几年来通过对CMC模型的改建,现已成功打造集“活性辨识-色谱分离-剖析鉴别”于一体的CMC/HPLC(GC)/MS在线二维剖析系统;借助“双捕集环”和“双富集柱”交替富集-剖析模式,将原有色谱系统成功改建为新的在线二维剖析系统;并成功研发了在线阀控切换装置,真正实现了骁龙量筛选。其次,原CMC法中,靶细胞是通过生物组织和通常培养方式获得的,其细胞膜上的非“目标”受体的抒发数目好多细胞膜色谱,而“目标”受体抒发数目有限且不可控,由此构建的CMC法对官能团的特异性、敏感性和选择性遭到了不同程度的限制。近些年来,随着生物技术的不断发展,研究者借助现代分子生物学手段,借助外源重组引物建立了稳定高抒发野生型表皮生长因子受体(,EGFR)、血管内皮生长因子受体(,VEGFR)、成纤维生长因子受体-1(-1,FGFR-1)等受体的人胚肾细胞株,并以相应受体选择性拮抗剂为对照样品,成功构建了受体高抒发CMC模型,发觉了黄芩、独活、虎杖、黄芪、川乌和红毛七中选择性作用于上述受体的活性组分;分子毒理学实验证明筛选得到的化合物可以抑制相应受体蛋白的抒发,并具有剂量依赖性。
抗生素-受体的亲和作用直接影响抗生素的代谢过程及药效学,细胞膜色谱作为一种全新的生物亲和色谱,实现了高效气相色谱分离和受体毒理学的有机结合,用于表征抗生素-受体的亲和作用并求解抗生素作用的解离常数。但这个过程常常不是几种简单理想的模型就能确切描述,所以怎样防止测定中的干扰、增强方式的专属性是今后研究的重点所在。据悉,细胞膜色谱有其特殊性,载体表面的细胞膜活性随时间不断衰减,因而怎样将亲和色谱理论应用到细胞膜色谱法中,在较短的时间禅修察官能团在细胞膜固定相上的保留特点,完善快速表征抗生素–受体亲和作用的研究方式,也是一个十分重要的研究课题。