主要用途
细胞膜流动性（）PDA萤光检查试剂是一种致力通过二恶英癸酸萤光颜料，选择性地与细胞膜整合，
并与之形成空间交互作用，产生激基缔合物，其萤光充溢波长的转移，即萤光比值的提高或减缓，来剖析
膜流动性的而精典的技术方式。该技术经过悉心研发、成功实验证明的。其适用于各类人体或植物贴
壁或漂浮细胞膜流动性的动力学检查。产品严格无菌，即到即用，活体检查，操作简易细胞膜流动性，性能稳定。
技术背景
细胞膜和细胞质微管以及微丝的动力学特点和微泡和囊泡内脂类的流动动力学，即流变学（）细
胞功能，遭到细胞膜流动性（）或黏性（）调节，包括细胞膜酶系的活化，微管和微丝的特
定装配或流动，物理逼迫物受体亲和力的加强，膜结构和功能的作用等。一旦调节失衡，会造成病理演化
或膜性变异。二恶英癸酸（acid；PDA）为多环芳香烃（）化
合物，一种亲脂性二恶英萤光探针颜料，用于膜生物化学学研究：第一，具有亲脂性；第二，与细胞膜脂
质具有类似性（），可以与细胞膜整合；第三，步入膜结构空间后，与之形成交互作用，产生激基缔
合物（），其萤光充溢波长由372nm转移到470nm，通过缔合物和单体的萤光比值（ratio），剖析膜流
动性强弱，包括动力学，影响因子等。
产品内容
染色液（A）
下挫
稀释液（B）
毫升
清除液（C）
毫升
加强液（D）
下挫
产品说明书
1份
保存方法
保存清除液（C）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；染色液（A）防止光照；有
效保证6月
用户自备
胰蛋白酶乙二胺四甲酸混和液（12024）：用于细胞脱离操作
细胞培养液（12052）：用于细胞开裂操作
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
微型台式离心机：用于样品操作
培养箱：用于染色孵育
（共聚焦）萤光显微镜：用于萤光定性剖析
比色皿或白色96孔板：用于萤光定量剖析的容器萤光分光光度仪或萤光酶标仪：用于萤光定量剖析
细胞流式仪：用于萤光剖析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（A）置入冰槽里熔化，稀释液（B）
和加强液（D）放进25℃恒温水槽里预热。之后分别移出xx下挫染色液（A）和xx下挫
加强液（D）到新的1.5毫升离心管，加入980下挫稀释液（B），混匀后，在冰槽里静置
（共5次操作量），并标记为染色工作液，置于暗室里。之后进行下述操作。
一、直接法
1．打算1个96孔细胞培养板的待测细胞，每孔布满率达70％（约1X105细胞数）
2．当心抽去细胞培养液
3．轻轻顺着孔壁加入xx下挫清除液（C）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
4．当心抽去清除液（C）
5．加入xx下挫富含染色液（A）、稀释液（B）和加强液（D）的染色工作液，
覆盖培养孔表面
6．放进25℃细胞培养箱里，孵育20分钟（注意避光）
7．当心抽去染色工作液
8．当心加入xx下挫清除液（C）
9．当心抽去清除液（C）
10．重复实验步骤8至9一次
11．当心加入xx下挫清除液（C）
12．选择下述检查：
一、即刻在倒置萤光显微镜下进行观察
1）单体萤光（二向色性混频器迸发波长350nm，充溢波长370nm，干涉混频器405nm波长）――
可见浅黄色萤光；假如硬度显著，表明膜流动性减小
2）激基缔合物（）萤光（二向色性混频器迸发波长350nm，充溢波长470nm）――可见
深红色萤光；假如硬度明显减小，表明膜流动性减小
二、即刻在萤光酶标仪测量（迸发波长350nm，充溢波长370nm和470nm）：获得相对萤光单位
（unit；RFU）以及/的比值：比值高，膜流动性强
二、间接法
1．打算1个12孔细胞培养板的待测细胞，每孔布满率达70％（约2X106细胞数）
2．当心抽去细胞培养液
3．加入xx毫升清除液（C）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
4．当心抽去xx毫升清除液（C）
5．加入500下挫用户自备的胰蛋白酶乙二胺四甲酸混和液，布满整个培养孔表面
6．置入37℃培养箱1分种
7．轻轻晃动培养板，使细胞开裂，之后加入1毫升用户自备的细胞培养液
8．移入1.5毫升离心管（注意：漂浮细胞从这一步开始）
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9．放进微型台式离心机离心5分钟，速率为1000g
10．当心抽去碱液
11．加入xx下挫富含染色液（A）、稀释液（B）和加强液（D）的染色工作液
12．用200下挫枪身上下轻盈抽吸，混匀细胞颗粒群
13．放进25℃细胞培养箱里，孵育20分钟（注意避光）
14．放进微型台式微型离心机离心5分钟，速率为1000g
15．当心抽去碱液
16．加入xx下挫清除液（C），混匀细胞颗粒群
17．放进微型台式微型离心机离心5分钟，速率为1000g
18．当心抽去碱液
19．重复实验步骤16至18一次
20．加入xx下挫清除液（C），混匀细胞颗粒群
21．进行下述检查
选择一、（共聚焦）萤光显微镜观察
1．混匀后，移出50下挫在载玻片上
2．即刻进行载玻片压片，在萤光显微镜下进行观察：
1）单体萤光（二向色性混频器迸发波长350nm，充溢波长370nm，干涉混频器405nm波长）――
可见浅黄色萤光；假如硬度显著，表明膜流动性减小
2）激基缔合物（）萤光（二向色性混频器迸发波长350nm，充溢波长470nm）――可见
深红色萤光；假如硬度明显减小，表明膜流动性减小
选择二、细胞流式仪剖析
1.混匀后，即刻进行细胞流式仪剖析：观察5000个细胞以上
迸发波长
360nm
萤光颜色
黑色
充溢波长
单体波长400nm和缔合物波长450nm
（70nm波宽）
萤光变化
构建象限图/散点图
选择三、荧光分光光度仪或萤光酶标仪测定
1．混匀后，移出100下挫到红色96孔板里或100下挫比色皿里
2．即刻进行萤光分光光度仪或萤光酶标仪测定（迸发波长350nm，充溢波长370nm和470nm）：获得相
对萤光单位（unit；RFU）以及/的比值：比值高，膜流动性强
注意事项
1．本产品为20次（0.2毫升工作液）操作2．操作时细胞膜流动性，须戴手套
3．待测细胞建议不要过分饥饿或过度生长
4．操作时，防止污染碱液，尤其是稀释液（B）
5．建议细胞染色完成后，即刻进行萤光检查剖析
6．孵育时，防止光照
7．本公司提供系列膜流动性检查试剂产品
质量标准
1．本产品经鉴别性能稳定
2．本产品经鉴别萤光清晰