产品编号:
产品组成:
产品组成
20-200T
50-500T
组份A:TMA-DPH染色液
100μL
250μL
组份B:稀释液
25mL
100mL
保存条件:
2-8℃避光。常年-20℃避光保存。染色液防止反复冻融,须要常年保存可以分装后-20℃保存。有效期1年。
产品简介:
膜的流动性是生物膜结构的基本特点之一,主要指膜脂肪酸链部份及膜蛋白的运动状态。膜脂质分子在相变气温以上条件下主要有侧向扩散、旋转、左右摇摆、伸缩振荡、翻转及异化运动等形式。膜蛋白的运动形式大体分为侧向及旋转运动,主要受脂类双分子层的影响。脂肪酸不饱和键含量和链的宽度显著影响着膜脂流动性细胞膜流动性,不饱和键的存在会增加膜脂分子间排列的有序性,进而降低膜的流动性细胞膜流动性,短链能减少脂肪酸链尾部互相作用,在相变室温下,不便于凝集,再者,脂肪酸烃链围绕C-C键由全反式构象到歪扭()的旋转异构运动,也可使流动性加强。
生物膜适合的流动性是彰显生物膜正常功能的必要条件,在一定范围内,膜流动性降低,有利于膜中酶分子的扩散和旋转运动,使酶活性降低。一些载体蛋白分子的运动性也取决于膜中脂质分子的流动性。研究发觉病变对放疗抗生素形成的耐药性主要与细胞膜P糖蛋白过度抒发芦丁及其相关酶系活性改变有关,也有许多研究表明耐药细胞膜流动性较亲代敏感细胞显著降低。另有实验研究发觉囊肿癌细胞的恶性程度随着膜流动性的降低而降低,癌症及转移的病变细胞的膜流动性远远低于非转移细胞。因而,对敏感及耐药的病变细胞膜流动性的检测有着重要的意义。
膜流动性的测定方式主要有萤光探针标记,电子载流子共振以及差示扫描量热法,x线衍射,棱碰共振等。
我司TMA-DPH试剂盒是借助TMA-DPH测定膜流动性的萤光探针法,它在脂蛋白及其类似系统的单分子层动力学研究中非常有用。DPH及其衍生物(比如TMA-DPH)都呈圆锥形,会发生基于按长分子轴线平行排列而形成发射萤光向偶极跃迁。比如,它们对因为周围固醇互相作用而造成的再定位十分敏感。它们广泛地被用于旋转运动研究中的萤光偏振光剖析。
传统的DPH探针可以步入细胞内,我司试剂盒膜示踪萤光探针TMA-DPH不能步入细胞内,因而TMA-DPH探针较DPH探针能更确切的反应膜脂流动性,本探针的最大迸发波长为355nm,最大发射波长为430nm。
细胞膜流动性()TMA-DPH萤光检查试剂盒试剂盒以外自备试剂耗材和仪器:
●含有偏振光测量装置的设备:萤光分光光度计/酶标仪●离心机●HBSS(无酚红)●PBS
使用注意事项:
●螺旋盖微量管装试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体搜集至管底,防止开盖时液体散落。
●染色液为DMSO碱液,夏季温度较低时在温度时为融化状态,极易黏附在管壁、吸头壁。注意须要加热溶化,吸头也须要置于培养箱预热,否则容易再度融化在吸头内壁形成耗损。
●细胞处理须要当心操作,尽量避开人为的损伤细胞。
●染色后立刻进行剖析。
●标记的条件因细胞种类而异,依据不同样本的实际染色结果做相应调整,在每次实验前,请先确定最佳条件。
●必须使用细胞萤光检查专用的白色细胞培养板。
●以下步骤仅供参考。请依照实际实验方案实际或则参考文献实验。
使用方式:
1、染色工作液的配制:
用稀释液稀释TMA-DPH探针1000倍-10000倍,配制成TMA-DPH染色工作液。
【注】:
●也可以不用试剂盒中的稀释液,直接用HBSS或无血浆培养基稀释即可。
●使用前做预实验在推荐含量范围内测试选取最佳含量。
●推荐该探针加载含量在1000-5000倍稀释,具体的使用含量需按照实验要求进行优化。
2、用染色工作液重悬细胞,在37℃孵育15-30分钟。
3、用pH7.4HBSS或20mMHEPES或PBS漂洗细胞1次。
4、用pH7.4HBSS或20mMHEPES或PBS重悬细胞。
5、用该细胞进行测量。迸发波长355nm,发射波长430nm。
按下述公式估算萤光偏振光度P:
P=(IVV-GIVH)/(IVV+GIVH)
其上校正因子G=IHV/IHH
细胞膜流动性()TMA-DPH萤光检查试剂盒式中:
IVV:起偏和检偏器光轴同为垂直方向时测得的萤光硬度;
IVH:起偏和检偏器光轴分别为垂直和水平方向时测得的萤光硬度。
IHV:起偏和检偏器光轴分别为水平和垂直方向时测得的萤光硬度;
IHH:起偏和检偏器光轴同为水平方向时测得的萤光硬度。
P值越大,流动性越小;P值越小,流动性越大。
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