1.本发明涉及蛋白质提取试剂领域，具体涉及一种蛋白质提取试剂及其制备方式以及蛋白质提取方式。
背景技术：
2.蛋白质组学研究才能通过建立细胞中蛋白质抒发的时间及空间差别图谱阐明生命规律，蛋白质的sds聚丙烯丙酯凝胶电泳分离技术是蛋白质组学研究的关键技术，而对蛋白组学差别剖析的关键技术是总蛋白是否完全提取，在总蛋白的提取上，细胞裂解液是广泛使用在蛋白剖析和测量上的一种试剂，因裂解细胞或组织的硬度而被分为强、中、弱三种，分别用于不同的使用中，但是这三种细胞组织裂解液均不能否完全提取出细胞或组织中的全蛋白，由于其条件的限制，常常会出现细胞沉淀或大量不溶于裂解液中的脂蛋白等；
3.近些年来，蛋白提取越来越专业化，如细胞核蛋白提取、细胞膜蛋白提取、细胞浆蛋白提取和线粒体蛋白提取等，分别用于不同的科研领域，而且这种技术依然存在不能否完全提取出总蛋白的缺点；
4.ripa提取总蛋白的方式以价钱低廉、操作简单及重复性较好等特征被广泛应用在蛋白质组学研究中，广泛采用的试剂有十二羟基磺酸钠、二乙基亚砜、曲拉通等，还能起到裂解细胞推动蛋白质溶化，避免细胞裂解液中蛋白质降解等作用，大大提升了细胞或组织中全蛋白的提取，然而，在蛋白提取前处理步骤较为繁杂，大大降低了操作时间，降低了组织或细胞被污染的几率。
技术实现要素：
5.本发明要解决的技术问题是现有的在蛋白提取前处理步骤较为繁杂，大大降低了操作时间，降低了组织或细胞被污染的机率，本发明提供一种蛋白质提取试剂，本发明还提供一种蛋白质提取试剂的制备方式，本发明还提供一种蛋白质提取方式，才能不须要提取前对细胞或组织进行前处理，才能减短提取组织或细胞中全蛋白的时间，极大的降低了蛋白质样本被污染的可能，就能大大的增强细胞和组织中总蛋白的提取效率，且成本较为低廉；根据一种蛋白提取试剂的使用方式进行蛋白质的提取才能在极短的时间内完成蛋白的提取，并在短时间内的到细胞或组织中的全蛋白，添加的尿素、聚乙二醇辛基氰基醚才能有效的裂解细胞和组织推动蛋白质溶化，添加的乙二胺四甲酸和二乙基亚砜，有助于抑制蛋白质降解，才能而不减少蛋白活性并提取到组织或细胞中抒发量较低的蛋白，用以解决现有技术造成的缺陷。
6.为解决上述技术问题本发明提供以下的技术方案：
7.第一方面，一种蛋白质提取试剂，其中，包含尿素、十二羟基氯化钠、聚乙二醇辛基氰基醚、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、乙二胺四羧酸、二乙基亚砜。
8.上述的一种蛋白质提取试剂，其中，所述尿素的质量容积比为40g/l；
9.所述十二羟基氯化钠的质量容积比为1g/l；
10.所述聚乙二醇辛基甲基醚的容积百分浓度为0.1％；
11.所述氟化钠的质量容积比为8g/l；
12.所述硝酸钾的质量容积比为0.2g/l；
13.所述乙酸氢二钠的质量容积比为1.42g/l；
14.所述乙酸二氢钾的质量容积比为0.27g/l；
15.所述乙二胺四羧酸的质量容积比为8g/l；
16.所述二乙基亚砜的容积百分浓度为1％。
17.上述的一种蛋白质提取试剂，其中，还包含浓硫酸，采用所述浓硫酸将所述蛋白质提取试剂的ph值调至7.0
‑
7.5。
18.第二方面，一种蛋白质提取试剂的制备方式，其中，包含以下步骤：
19.步骤a1：将乙二胺四羧酸粉末溶化于800ml的去离子水底；
20.步骤a2：加入40g尿素溶化；
21.步骤a3：依次加入十二羟基氯化钠、聚乙二醇辛基甲基醚、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、二乙基亚砜后溶化并定容至制得蛋白质提取试剂。
22.上述的一种蛋白质提取试剂的制备方式，其中，在所述步骤a3得到的所述蛋白质提取试剂中加入浓硫酸将ph值调至7.0
‑
7.5，此后加去离子水定容至1l，在使用0.2μm的滤器进行过滤抑菌。
23.第三方面，一种蛋白质提取方式，其中，包含以下步骤：
24.步骤b1：获取组织，并将所述组织放在乙酸缓冲盐氨水中漂洗三次，除去多余的血液或培养液；
25.步骤b2：以100mg的组织或细胞配1ml的蛋白质提取试剂的比列加入离心管中，并加入碾磨瓷珠放在组织匀浆器中碾磨；
26.步骤b3：碾磨完成后在冰上静置5min，此后离心获得总蛋白溶化上清。
27.上述的一种蛋白质提取方式，其中，步骤b2中需加入3
‑
7颗的碾磨瓷珠放在组织匀浆器中以气温为4℃的条件下碾磨2min。
28.上述的一种蛋白质提取方式，其中，步骤b3中所述离心的条件为下离心5min。
29.第四方面，采用第一方面提供的一种蛋白质提取试剂在蛋白聚丙烯丙酯凝胶电泳、蛋白blot定性和/或定量以及免疫沉淀和免疫共沉淀中的应用。
30.根据上述本发明一种蛋白质提取试剂及其制备方式以及蛋白质提取方式提供的技术方案具有以下技术疗效：
31.本发明提供的一种蛋白提取试剂不须要提取前对细胞或组织进行前处理，才能减短提取组织或细胞中全蛋白的时间，极大的降低了蛋白质样本被污染的可能，就能大大的增强细胞和组织中总蛋白的提取效率，且成本较为低廉；
32.根据一种蛋白提取试剂的使用方式进行蛋白质的提取才能在极短的时间内完成蛋白的提取，并在短时间内的到细胞或组织中的全蛋白，添加的尿素、聚乙二醇辛基氰基醚才能有效的裂解细胞和组织推动蛋白质溶化，添加的乙二胺四甲酸和二乙基亚砜细胞膜蛋白，有助于抑制蛋白质降解，才能而不减少蛋白活性并提取到组织或细胞中抒发量较低的蛋白。
附图说明
33.图1为各个样品的wb测量且测量指标为gapdh的结果图；
34.图2为各个样品的wb测量且测量指标为β
‑
actin的结果图。
具体施行方法
35.为了使发明实现的技术手段、创造特点、达成目的和功效便于明白了解，下结合具体图示，对本发明施行例中的技术方案进行清楚、完整地描述，其实，所描述的施行例是本发明的一部份施行例，而不是全部的施行例。
36.基于本发明中的施行例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他施行例，都属于本发明保护的范围。
37.须知，本说明书所附隐喻所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所阐明的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可施行的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能形成的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本发明所阐明的技术内容得能囊括的范围内。
38.同时，本说明书中所引用的如“上”、“下”、“左”、“右”、“中间”及“一”等的用语，亦仅为易于表述的明了，而非用以限定本发明可施行的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容下，当亦视为本发明可施行的范畴。
39.本发明的一较佳施行例是提供一种蛋白质提取试剂及其制备方式以及蛋白质提取方式，目的是不须要提取前对细胞或组织进行前处理，才能减短提取组织或细胞中全蛋白的时间，极大的降低了蛋白质样本被污染的可能，就能大大的增强细胞和组织中总蛋白的提取效率，且成本较为低廉；依据一种蛋白提取试剂的使用方式进行蛋白质的提取才能在极短的时间内完成蛋白的提取，并在短时间内的到细胞或组织中的全蛋白，添加的尿素、聚乙二醇辛基氰基醚才能有效的裂解细胞和组织推动蛋白质溶化，添加的乙二胺四甲酸和二乙基亚砜，有助于抑制蛋白质降解，才能而不增加蛋白活性并提取到组织或细胞中抒发量较低的蛋白。
40.制备蛋白质提取试剂，将乙二胺四羧酸粉末溶化于800ml的去离子水底获得质量容积比为8g/l的碱液，随即加入40g的尿素溶化，此后依次加入质量容积比为1g/l的十二羟基氯化钠、体积百分浓度为0.1％的聚乙二醇辛基氰基醚、质量容积比为8g/l的硫酸钠、质量容积比为0.2g/l的硝酸钾、质量容积比为1.42g/l的乙酸氢二钠、0.27g/l的乙酸二氢钾、体积百分浓度为1％的二酰基亚砜后溶化并定容至制得蛋白质提取试剂；
41.随即在蛋白质提取试剂中加入浓硫酸将ph值调至7.0
‑
7.5，此后加去离子水定容至1l，在使用0.2μm的滤器进行过滤抑菌；
42.获取组织，采用小鼠肾脏330mg，分为a组、b组、c组、d组，每组组织采用50mg的小鼠肾脏，并将a组、b组、c组、d组中的组织放在乙酸缓冲盐氨水中漂洗三次，除去多余的血液或培养液，a组组织中使用进行操作、b组使用进行操作、c组使用进行操作并加入苯氨基磺酰氟、d组使用进行操作并加入苯氨基磺酰氟；
43.a组、b组、c组、d组分别配0.5ml的蛋白质提取试剂并加入离心管中，随即加入3
‑
7颗的碾磨瓷珠放在组织匀浆器中以气温为4℃的条件下碾磨2min；
44.碾磨完成后在冰上静置5min，此后在的条件下离心5min获得a组、b组、c组、d组的总蛋白溶化上清。
45.获取的a组、b组、c组、d组总蛋白溶化上清进行wb测量，测量指标为gapdh(甘油醛
‑3‑
乙酸酯化酶)和β
‑
actin(肌动蛋白)，结果如图1
‑
2所示。
46.综上，本发明的一种蛋白质提取试剂及其制备方式以及蛋白质提取方式，才能不须要提取前对细胞或组织进行前处理，才能减短提取组织或细胞中全蛋白的时间，极大的降低了蛋白质样本被污染的可能，就能大大的增强细胞和组织中总蛋白的提取效率细胞膜蛋白，且成本较为低廉；根据一种蛋白提取试剂的使用方式进行蛋白质的提取才能在极短的时间内完成蛋白的提取，并在短时间内的到细胞或组织中的全蛋白，添加的尿素、聚乙二醇辛基氰基醚才能有效的裂解细胞和组织推动蛋白质溶化，添加的乙二胺四甲酸和二乙基亚砜，有助于抑制蛋白质降解，才能而不减少蛋白活性并提取到组织或细胞中抒发量较低的蛋白。
47.以上对发明的具体施行例进行了描述。须要理解的是，发明并不局限于上述特定施行方法，其中未尽详尽描述的设备和结构应当理解为用本领域中的普通形式给以施行；本领域技术人员可以在权力要求的范围内作出各类变型或更改作出若干简单推演、变形或替换，这并不影响发明的实质内容。
技术特点：
1.一种蛋白质提取试剂，其特点在于，包含尿素、十二羰基氯化钠、聚乙二醇辛基氰基醚、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、乙二胺四羧酸、二乙基亚砜。2.如权力要求1所述的一种蛋白质提取试剂，其特点在于，所述尿素的质量容积比为40g/l；所述十二羟基氯化钠的质量容积比为1g/l；所述聚乙二醇辛基氰基醚的容积百分浓度为0.1％；所述硝酸钠的质量容积比为8g/l；所述硝酸钾的质量容积比为0.2g/l；所述乙酸氢二钠的质量容积比为1.42g/l；所述乙酸二氢钾的质量容积比为0.27g/l；所述乙二胺四羧酸的质量容积比为8g/l；所述二乙基亚砜的容积百分浓度为1％。3.如权力要求2所述的一种蛋白质提取试剂，其特点在于，还包含浓硫酸，采用所述浓硫酸将所述蛋白质提取试剂的ph值调至7.0
‑
7.5。4.一种蛋白质提取试剂的制备方式，其特点在于，包含以下步骤：步骤a1：将乙二胺四羧酸粉末溶化于800ml的去离子水底；步骤a2：加入40g尿素溶化；步骤a3：依次加入十二羟基氯化钠、聚乙二醇辛基甲基醚、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、二乙基亚砜后溶化并定容至制得蛋白质提取试剂。5.如权力要求4所述的一种蛋白质提取试剂的制备方式，其特点在于，在所述步骤a3得到的所述蛋白质提取试剂中加入浓硫酸将ph值调至7.0
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7.5，此后加去离子水定容至1l，在使用0.2μm的滤器进行过滤抑菌。6.一种蛋白质提取方式，其特点在于，包含以下步骤：步骤b1：获取组织，并将所述组织放在乙酸缓冲盐氨水中漂洗三次，除去多余的血液或培养液；步骤b2：以100mg的组织或细胞配1ml的蛋白质提取试剂的比列加入离心管中，并加入碾磨瓷珠放在组织匀浆器中碾磨；步骤b3：碾磨完成后在冰上静置5min，此后离心获得总蛋白溶化上清。7.如权力要求6所述的一种蛋白质提取方式，其特点在于，步骤b2中需加入3
‑
7颗的碾磨瓷珠放在组织匀浆器中以气温为4℃的条件下碾磨2min。8.如权力要求7所述的一种蛋白质提取方式，其特点在于，步骤b3中所述离心的条件为下离心5min。9.如权力要求1
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3任一项所述的一种蛋白质提取试剂在蛋白聚丙烯丙酯凝胶电泳、蛋白blot定性和/或定量以及免疫沉淀和免疫共沉淀中的应用。
技术总结
本发明公开了一种蛋白质提取试剂及其制备方式以及蛋白质提取方式，蛋白质提取试剂包含质量容积比为40g/L的尿素、质量容积比为1g/L的十二羰基氯化钠、体积百分浓度为0.1％的聚乙二醇辛基氰基醚、质量容积比为8g/L的硫酸钠、质量容积比为0.2g/L的硝酸钾、质量容积比为1.42g/L的乙酸氢二钠、质量容积比为0.27g/L的乙酸二氢钾、质量容积比为8g/L的乙二胺四羧酸、体积百分浓度为1％的二酰基亚砜；制备方式包含将乙二胺四羧酸粉末溶化于800mL去离子水后加40g尿素溶化，加十二羟基氯化钠、聚乙二醇辛基甲基醚、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、二乙基亚砜溶化定容至1升制得蛋白质提取试剂。提取试剂。提取试剂。
技术研制人员：张煜
受保护的技术使用者：百美特（北京）生物科技有限公司
技术研制日：2021.06.19
技术公布日：2021/11/8