地址:河北省石家庄市滨江区滨安路688号天和高科园2实验目的流式细胞仪测量各组细胞线粒体膜电位变化。仪器试剂2.1主要试剂表2.1.1主要试剂仪器厂家胎牛血浆日本,缓冲液英国,培养基日本,培养基日本,Gibco抗生素、链霉素双抗()0.25%日本,-1线粒体膜电位测量试剂盒上海,碧云天2.2主要仪器表2.2.1主要仪器仪器厂家CO2细胞培养箱法国,(SW-CJ-1FD)倒置照相显微镜日本,Leica(IX51)无菌操作台中国,上海净化(SW-CJ-1FD)低速离心机中国,北京卢湘仪(5702R)流式细胞仪日本,BD()实验方式3.1细胞培养H9c2细胞株为贴壁细胞,培养于含培养液,待细胞长至80左右时,用0.25%胰酶消化传代,放在CO2,37恒温培养箱中,平均代,取对数生长期细胞进行实验。3.2膜电位测量检查JC-1染色工作液的配制:取适量容积的JC-1(200),根据每50JC-1(200)须要加入mL的超纯水比列稀释JC-1细胞膜电位,混和后剧烈涡旋混匀,之后加入JC-1色缓冲液(5),混匀后即得JC-1染色工作液。
将对数期生长的细胞消化、离心和重悬后,计数,以每孔3-510中,培养过夜后,每孔加入不同含量的SM-1曝露48小时后,用胰酶消化并搜集细地址:广东省广州市滨江区滨安路688号天和高科园20.5mL的细胞培养液中,之后加入0.5mLJC-1染色工作液,颠倒混匀后,放置在细胞培养箱中37孵育20分钟。JC-1染色缓冲液(5)需加入mL分馏水的比列,在冰浴条件下配置适量容积的JC-1染色缓冲液(1)。37孵育20分钟结束后,以怠速600分钟,弃去上清细胞膜电位,尽量不要吸出细胞。之后用JC-1染色缓冲液(1)清洗次,离心沉淀细胞,弃去上清。之后加入适量容积的JC-1染色缓冲液(1)重悬后,使用流式细胞仪测量,迸发光波长为525nm,发射光波长为595nm,测定萤光硬度。结果与讨论图4.1是采用JC-1染色法测量线粒体膜电位结果。结果显示,与对照组相比,DOX1μmolL-1处理细胞后可以明显增加线粒体膜电位(p<0.01),柴胡水提取液12.5,25-1组均就能明显增加线粒体膜电位(p<0.05,p<0.01)。结果提示,图4.1各组细胞线粒体膜电位变化