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德国细胞膜片钳电压钳制

更新时间:2023-10-24 文章作者:佚名 信息来源:网络整理 阅读次数:

对抗生素作用机制的研究,在通道电压记录中,可分别于不同时间、不同部位(膜内或膜外)施加各类含量的抗生素,研究它们对通道功能的可能影响,了解这些选择性作用于通道的抗生素影响人和植物生理功能的分子机理。这是目前膜片钳技术应用普遍的领域,既有对中药抗生素机制的阐述,也普遍用在重要毒理的研究上。如开丽等报导细胞贴附式膜片钳单通道记录法观测到灵芝酸酐组鞣质可控制正常和“缺血”诱导的小鼠脑部皮层神经元L-型钙通道的开放,进而降低钙内流,对缺血细胞可能有保护作用。陈龙等报导采用细胞贴附式单通道记录法发觉麻黄碱对培养的小鼠心室肌细胞L-型钙通道有阻滞作用。封接是膜片钳记录的关键步骤之一。日本细胞膜片钳电压钳制I5O物理好资源网(原物理ok网)

过去觉得,膜片钳只能在培养细胞或酶解的细胞上进行,这样得到的细胞膜表面比较光滑,才才能产生高阻封接,但缺点是组织的正常三维结构被破坏,但是对神经中枢内突触特有的传递机能的研究未能展开。于是,一些学者构建了组织切片膜片钳技术(Slicepatch),能够在喂奶植物脑片制备上做全细胞记录。1992年细胞膜片,在脑片膜片钳技术上,日本实验室***报导在在体猫的视皮层用膜片钳全细胞记录研究了视剌激诱发的激动性和***性突触后电位互相影响及节律性膜电位的变化规律。1993年,加拿大的Dodt和合作,借助红外电视显微镜监视,致使膜片钳记录不但能否在神经元胞体及其树突上进行,并且可同时在这两个不同的部位作膜片钳记录。日本膜片钳专题膜片钳技术实现了小片膜的孤立和高阻封接的产生,增宽了记录频带范围,增强了帧率。I5O物理好资源网(原物理ok网)

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一、记录设备首先,尽可能建立膜片钳记录设备是实验前的重要步骤,如用模型细胞测定电子设备、安装并测试应用软件、调节光学显微镜、检验防震工作台等。二、微电极的制备膜片钳电极是用直径为1-2mm的毛细玻璃管拉制成的。标准的毛细玻璃管(外经1.5mm,管壁厚0.3mm)适宜于制做单通道记录的微电极,而全细胞记录则应选管壁较薄(0.16mm)的毛细玻璃管,这样可以使电极阻抗较低。三、封接()技术封接(seal)是膜片钳记录的关键步骤之一。封接不好噪音太大必然影响细胞膜联通号的记录,通常要求封接阻抗起码20GΩ才可进行常规记录。为了产生良好封接必须保持清洁的氨水、良好的视野以及适当的电极镀膜。为了获得较好的"百兆欧封接",细胞表面必须裸露便于微电极前列能接触细胞,细胞的大小也是成功记录的个诱因,通常选择10-20um的细胞比较理想。I5O物理好资源网(原物理ok网)

神经药理研究室是现代药理学教育部重点实验室和安徽省应用药理重点实验室的组成部份,在上世纪八九十年代就开始成立膜片钳实验室细胞膜片,属国外较早一批举办此工作的课题组,二六年来,在导师肖杭院士领导、全体研究生的共同努力下,如今这门技术早已成熟稳定,并得到国际国外同行的认可。基金会的颁奖评语∶膜片钳技术燃起了细胞和分子水平的生理学研究的**之火,为细胞生理学的研究带来了一场**性的变化,它和基因克隆技术并驾齐驱,给生命科学研究带来了巨大的前进动力。细胞膜由单糖双分子层和和蛋白质构成。I5O物理好资源网(原物理ok网)

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高阻封接问题的解决除了改善了电压记录性能,还骤然出现了研究通道电压的多种膜片钳形式。按照不同的研究目的,可制成不同的膜片构象。(1)细胞吸附膜片(cell-)将两次拉制后经加热抛光的微管电极放在清洁的细胞膜表面上,产生高阻封接,在细胞膜表面隔离出一小片膜,旋即通过微管电极对膜片进行电流钳制,区分检测膜电压,称为细胞贴附膜片。因为不破坏细胞的完整性,这些方法又称为细胞膜上的膜片记录。此时跨膜电位由玻管固定电位和细胞电位决定。因而,为测定膜片一侧的电位,需测定细胞膜电位并从该电位除以玻管电位。从膜片的通道活动看,这些方式的膜片是极稳定的,因细胞骨架及有关代谢过程是完整的,所受的干扰小。一些学者构建了组织切片膜片钳技术(Slicepatch),能够在喂奶植物脑片制备上做全细胞记录。全手动膜片钳价钱I5O物理好资源网(原物理ok网)

屯流钳素向细胞内注入剌激电压,记录膜电位对剌激电压的反应。日本细胞膜片钳电压钳制I5O物理好资源网(原物理ok网)

细胞膜片钳记录(whole--)是应用*早,也是*广的钳位技术,它相当于连续的单电极电流钳位记录,也就是说全细胞记录类似于传统的细胞内记录,但它具有更大的优越性,如高码率、低噪音、极好的稳定性以及能控制细胞内的成份等。全细胞记录技采测定的是一个细胞内全部**通道的电压,记录过程中电极的氨水代替了原细胞质的成份。其实膜片钳记录技术与*初的单电极电流钳位相比进步了好多,尤其在单离子通道钳位记录方面,细胞或脑片的组织选择及实验碱液的制备一直是很重要的步骤。日本细胞膜片钳电压钳制I5O物理好资源网(原物理ok网)

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