在心血管研究中，人们常使用急性分离的心肌细胞做膜片钳或激光共聚焦实验，做上述实验时，须要细胞的数目不多，但要求细胞“耐钙”（不跳动）。怎样在分离时每次都能得到“耐钙”的心肌细胞，已成为人们的关注热点。
实际上细胞膜片，影响心肌细胞分离疗效的诱因好多，比如:(1)摘取肾脏到主动脉导尿迅速的时间，通常要求在2min以内，时间过长可发生心肌缺血-再灌注损伤；（2）主动脉存留过短常造成导尿穿过主动脉瓣而插入心室，过长会造成灌流液经主动脉分支流出，均可影响灌流疗效；（3）Langendoff装置事先要排尽气泡，否则气栓可引起心肌损伤；（4）注意调节灌流液的酸碱度，偏酸偏碱均可导致心肌损伤等。
一般采用离体灌流装置分离心肌细胞。首先用正常含钙液预灌注10-20min（冲残血,还氧债）→无钙液灌注5min（解除心肌细胞间的桥粒和联接）→Ⅱ型或Ⅰ型胶原酶循环灌注（解离细胞间结缔组织）。因为称取酶量、生产公司和批号不同还会影响消化的时间和疗效，所以各个研究小组报导胶原酶的消化时间也各不相同。通常当灌流液出现拉丝,肾脏坐果酥脆、颜色发白时停止胶原酶消化。
上述分离方式和注意事项可参见：
（1）张紫冠,李卫华,黄峥嵘等。SD小鼠心肌细胞分离方式探求。心血管复健医学刊物2010，19（3）：274-278
（2）廖华，糜涛，涂志业等。成年家兔心肌细胞分离方式的改良。中国组织工程研究与临床复健第13卷第33期2009；13（33）：6536-6539
（上述2篇论文可以从我的文献中“参考文献”类别中免费全文下载）
传统的心肌细胞分离方式常采用固定的消化时间，结果往往是“有时欢乐有时愁”。台湾学院的李贵荣院长倡导的“分段消化法”是分离心肌细胞“屡试不爽”的好方式。
前几天，翻阅往日的相片时，无意中听到了我们和李贵荣院士的一些相片，它唤起了我们一段美好的追忆：
1989-1990,我获得了世界卫生组织（WHO）的奖学金，在全苏肾脏病研究中心（俄罗斯）学习膜片钳技术。杨宝峰教授陆续在台湾筑波Eisai研究所（1991-1992）和美国旧金山肾脏病研究所（1995-1996）读博士后。李玉荣院士也曾在全苏肾病研究所（1991-1992）做访问学者。为了在西安医科学院举办膜片钳研究，当时均为教研室副部长和副院长的我们两人，即杨宝峰（毒理）、李玉荣（生理）徐长庆（病理生理），回国后自发组合成联合攻关小组。共同的理想，共同的信念，共同的战斗，使我们成为了休戚与共的好同事，堪称哈医大铁三角。
联合攻关小组（杨宝峰，李玉荣，徐长庆）在研讨膜片钳实验
1997.6.20–23，为了促进膜片钳技术在全省的推广，哈医大举行了《膜片钳理论和实验学习班》。聘请当时美国旧金山肾脏研究所的李贵荣研究员为主讲人，杨宝峰院士、李玉荣院士和我作为副讲人，并向学员领取了由我们两人编撰学习班课件。
学习班全体合照
大会结束时，我们还坐船游玩了美丽的松花江，并在芦苇丛中合照留影。
哈尔滨浦口合照（杨宝峰，李贵荣，李玉荣，徐长庆）
在此次大会上，李贵荣院长向我们介绍了分离心肌细胞的“分段消化法”。
所谓的“分段消化法”和传统的心肌细胞分离方式没有本质的不同，只是同一个肾脏施行胶原酶的消化时间不同。首先以灌流液拉丝,、心脏酥脆、颜色发白确定一个平均消化时间（比如，30min）后，每次施行心肌细胞分离时，在这一时间点前后几个时间点（比如20、25、30、35、40等）分别剪去少许心肌（通常由心底渐渐移至心尖），倒入KB液中吹打，镜下观察。在这种时间点中，总会有1个或多个时间点的消化时间合适细胞膜片，确保每次都能获得满意的分离疗效，堪称“事半功倍”或“以一当十”。
从此次学术大会后，我们成为了好同学，多次相互访问。
访问台湾学院时合照
海峡两岸心血管研讨会合照（云南）
“分段消化”分离心肌细胞的方式在本课题组的实践中时常奏效，因而，我乐意将它奉献给举办心肌细胞分离的同学，希望也能助你们一臂之力。
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