PAGEPAGE5膜片钳记录系统仪器简介：膜片钳技术是细胞电生理方面的低端技术，是研究细胞膜离子通道的重要工具。目前细胞膜离子通道的研究早已应用到了抗生素作用、环境对细胞膜离子通道的影响、神经网路研究以及癌症的确诊和医治等多个领域。膜片钳技术是神经科学、心血管、药物学和药效学、功能基因组学和许多遗传病深入研究的有力手段。仪器名称：膜片钳记录剖析系统主要设备：PC-2B放大器、放大器、正置显微镜、倒置显微镜、NIR-DIC成像系统、水镜头、微操纵器、微电极拉制仪、抛光仪、振动切块机等。仪器功能及应用范围：单细胞膜片钳记录（急性分离细胞、培养细胞）、脑片膜片钳记录（盲法、可视法）收费标准：培训费：1个月以内—500元；1~3个月—1000元。指导操作：院内20元/小时，院外40元/小时。独立操作：院内60元/天，院外120元/天（由两位指导老师认可培训合格，方可进行独立操作）。开放时间：周三至周日管理规定：⑴膜片钳记录剖析系统属于高档精密仪器，因而任何步入本室进行膜片钳实验的人员，必须经过本室专门人员培训合格认可后，经准许方可进行膜片钳放大器、微操纵器、拉制仪、切片机、显微镜等仪器的操作。
⑵在实验过程中，必须严格根据实验流程进行操作，不得私自修改操作步骤，不许自行调改仪器设置细胞膜片，以免引起仪器损毁。⑶仪器损毁赔付事宜根据我室赔付制度进行处理。⑷统一安排实验时间细胞膜片，使用仪器后作登记。⑸实验人员负责当日的水电安全和室内卫生。脑片膜片钳实验流程(PC-2B)一、脑片制做配制新鲜蔗糖氨水（4°C）和NaCl孵育液（温度，20~25°C）各1L。用乙醇曝晒刀片30min。麻醉植物：爪蟾—MS-222，小鼠—乌拉坦。解剖植物，取脑组织。切块：依照不同的植物和组织选择不同的方案。方案一：低熔点琼脂包埋组织后进行切块。方案二：普通琼脂作托进行切块。处理脑片：蔗糖氨水中40～60min（4°C或32°C）。孵育脑片：NaCl碱液中放置0.5~1h（温度）后可进行膜片钳实验。注：脑片制做过程需全程通入95%O2+5%CO2混和气。二、全细胞膜片钳记录（一）盲法将脑片放在灌隔栅内，用银线压牢，并确保灌流系统通畅、稳定。右手接触屏蔽罩以释放操作者身体静电。打开放大器POWER→ON，记录模式选择档。打开-clamp软件，点击按键，检测电压及内阻变化。系统选择-50~-80mV。
安装玻璃微电极。用注射器给电极内施加适度正压。增加电极入水，并接近脑片。封接：用微操纵器推进电极接触脑片，并逐步向脑片深处推动，当内阻忽然减小，电压增加1/3以上时，释放注射器内正压，平缓抽吸，渐渐产生百兆欧姆封接（）。破膜：轻拉注射器，忽然出现大的电容电压，表明已破膜，Whole-cell模式产生。迅速点击按键，记录模式选择VC档。点击按键，可观察电压变化，而且不记录、不保存。点击按键，可观察并保存电压变化。（二）可视法基本步骤同盲法，不同的是须要在步骤8之前打开监视器的软件，在水镜头下找到目的细胞后再将电极入水，渐渐接近脑片直到抵达该细胞，在可视的情况下完成后续步骤。单细胞膜片钳实验流程()一、单细胞急性分离通常过程为：解剖→切片→孵育→消化→洗酶→吹打→细胞贴壁。以急性分离小鼠海马神经元为例表述如下：配制人工脑脊液(ACSF)250ml。解剖：断头取脑，在冰凉（0~4°C）ACSF中取出海马。切块：将海马沿矢状位劈成400~600μm厚的脑片。孵育：脑片在ACSF中温度下孵育50min。消化：将孵育后的脑片移入酶消化液中，32°C消化25min。
洗酶：用ACSF洗脑片3次。吹打：依次用口径递减的三个吸管轻轻吹打脑片，制成单细胞悬液。贴壁：将单细胞悬液竖直静置5min，汲取上方细胞悬液加到培养皿中，约30min后细胞贴壁，即可进行膜片钳实验。注：细胞急性分离过程需全程通入95%O2+5%CO2混和气。二、全细胞膜片钳记录：单细胞膜片钳实验须要在倒置显微镜下进行，其步骤与脑片膜片钳记录过程基本相同。因为可直接看见细胞，故可以将微电极直接接近并接触目的细胞，完成封接、破膜等一系列过程。软件设置和放大器操作不同之处主要有以下几点：按下放大器POWER，记录模式选择Vm档步入记录软件：开机后按F8键步入MS-DOS系统→输入“cd”命令→输入“/”进入记录界面。File选择预先设定好的剌激参数。Trial→监测电压变化，进行封接和破膜，形成全细胞模式。记录模式选择档Trial→View观察电压变化，而且不记录、不保存。Trial→可观察并保存电压变化。拉制仪操作流程采用两步法拉制玻璃微电极：打开电源POWER(-)，预热10min。调节拉制参数。第1
