细胞膜黑色萤光染色试剂盒(DiI),CellKitwithDiI(Red)是一种以DiI为萤光探针,并提供了染色提高剂、能快速灵敏地对细胞膜进行蓝色萤光染色标记的试剂盒。
DiI即(3),全称为1,1'--3,3,3',3'-细胞膜片,分子式为,分子量为933.88,CAS号为41085-99-8,是最常用的细胞膜萤光探针之一,呈现橙黄色萤光。DiI是一种亲脂性羰花青()颜料,具有很长的亲脂性烃链,步入细胞膜后可以侧向扩散逐步使整个细胞的细胞膜被染色,染色后十分稳定。
DiI在步入细胞膜之前萤光十分弱,仅当步入到细胞膜后才可以被迸发出很强的萤光。DiI被迸发后可以发出橙黄色的萤光,DiI和磷酯单层膜结合后的迸发波谱和发射波谱参考图1。其中,最大迸发波长为549nm,最大发射波长为565nm。
图1.DiI和磷酯单层膜结合后的迸发波谱和发射波谱。
DiI被广泛用于正向或逆向的、活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或常年示踪剂(long-term)。DiI毒性很低,一般不会影响细胞的生存力()。被DiI标记的神经细胞在体外培养的条件下可以存活历时4周,在体内可以历时一年。DiI在经过固定的神经元细胞膜上的迁移速度为0.2-0.6mm/day,在活的神经元细胞膜上的迁移速度为6mm/day。
本试剂盒提供了染色提高剂,使细胞膜染色更推动速,萤光染色愈发明亮细胞膜片,染色背景更低。
本试剂盒不仅最简单的细胞膜萤光标记外,还可以用于测量细胞的融合和黏附,测量发育或移植过程中细胞迁移,通过FRAP(After)测量脂在细胞膜上的扩散,测量细胞毒性和标记脂蛋白等。
本试剂盒可以直接染色活的细胞或组织,染色时间一般为5-20分钟。对于固定的细胞或组织,一般宜使用配制在PBS中的4%多聚甲醛进行固定,使用其它不适当的固定液会造成萤光背景较高。本试剂盒对HeLa细胞的染色疗效参考图2。
图2.细胞膜黑色萤光染色试剂盒(DiI)对HeLa细胞的染色疗效。DiI的染色时间为10分钟。
DiI染色后可以兼容免疫萤光实验。建议使用碧云天的免疫染色通透液()(P0095)或使用洋玄参鞣质()配制的不会溶化细胞膜的通透液进行通透,其它去垢剂配制的通透液可能会溶化细胞膜上的脂质物质,导致DiI丧失结合位置,最终造成DiI的染色失效。但通透也可能会影响DiI在细胞膜上的定位并会降低细胞内的染色,具体实验中需按照实验的需求选择合适的细胞通透液。
本试剂盒大包装,假如用于流式细胞仪,每位样品的测量体系容积为0.5ml时,可以进行200次测量;96孔板每孔测量体系的容积为100μl时可以进行1000次测量。
包装清单: