2022年6月2日,复旦学院团队在Cell在线发表文章[1],报导了四次跨膜蛋白4()可以介导膜上大创口的修补。研究者发觉在细胞膜遭到激光、去污剂、细胞焦亡和自然杀伤细胞造成的损伤后,会迅速的在损伤处富集,在膜上形成名为TEM()的功能性结构单元,然后进一步组装产生微米级宏结构域,限制膜损伤的扩张以后对膜损伤进行修补,借以维持细胞在膜损伤后的正常生理功能。
另外,异常抒发的膜蛋白也常被用做抗生素靶向,但是在膜蛋白研究中,最难的莫过分膜蛋白的抒发和纯化,如:
●膜蛋白大多难溶于水,在制备过程中须要脂类或去垢剂包裹
●在外源抒发过程中容易损伤细胞,导致抒发量低
●在纯化时因为糖类存在细胞膜蛋白,蛋白会有损失,回产率低
●蛋白与膜分离后,氢键难维持易集聚失活
假如你也在膜蛋白制备中苦苦挣扎没有出路,丁香园将联合义翘为你们带来「多次跨膜蛋白的制备策略及案例分享」主题直播细胞膜蛋白,除了详尽讲解膜蛋白研究进展与技术重难点,就会从实际案例中分享膜蛋白开发研究策略,帮助你清扫膜蛋白研究中的障碍!
这么直播开始前,我们先来对膜蛋白纯化可能碰到的问题怎样解决一睹为快吧~
膜蛋白不抒发或则抒发量低
可以选择对目的片断重新建立,进行密码子优化或改变抒发寄主,也可以添加促溶标签或辅助蛋白。
蛋白构型不稳定且易集聚
添加辅助蛋白来确保构型正确,对个别可能导致集聚结构域进行截短或突变,调整蛋白缓冲液,添加还原剂或置换不同的去垢剂。
去垢剂千千万不会选
去垢剂大约分为非离子型、离子型和兼性离子型,非离子型以X-100和DDM为代表,通常比较温和,不易造成蛋白质变性;离子型以SDS为代表,对于膜蛋白溶化特别有效;兼性离子型结合了离子型和非离子型去垢剂的优点,以CHAPS为代表,一般用于膜蛋白结晶。
内容企划:邹礼平
内容初审:周育红