Lyso-Green是一种溶酶体()红色萤光探针,能通透细胞膜,可以用于活细胞溶酶体特异性萤光染色。
Lyso-Green为采用公司的DND-26进行了萤光标记的带有弱酸性的萤光探针,其中仅弱碱可部份提供质子,以维持pH在中性,可以选择性地滞留在偏碱性的溶酶体中,进而实现对于溶酶体的特异性萤光标记。中性红(Red)和吖啶橙()也都可以对溶酶体进行萤光染色,但中性红和吖啶橙的染色缺少特异性。Lyso-Green适用于活细胞染色,但不适宜用于固定后细胞的染色。
Lyso-Green的分子式为,分子量为398.7,其最大迸发光波长为504nm,最大发射光波长为511nm。Lyso-Green的物理结构式和迸发、发射波谱图参考图1。
图1.Lyso-Green的物理结构式(A)和迸发、发射波谱图(B)。
Lyso-Green是嗜酸性萤光探针,用于活细胞内碱性细胞器的标记和示踪。这种探针具有几个重要特点细胞膜选择性通透,包括高度选择靶点碱性细胞器和在纳摩尔含量有效标记活细胞。Lyso-Green必须在极低含量(一般约50nM)下就能获得优异的选择性。这种探针的滞留()机制似乎没有被研究清楚,但很可能与碱性细胞器的质子化和滞留性有关,Lyso-Green探针的内吞作用动力学研究显示颜料步入活细胞的摄取时间仅几秒即可。但是,这种溶酶体探针会造成溶酶体被碱化,常年孵育会促使溶酶体pH值的降低。为此,建议成像前用探针孵育细胞的时间不能太久。Lyso-Green探针具体使用含量和孵育时间须要依照自身实验条件和具体细胞种类来进行摸索以达到满意的染色疗效。Lyso-Green染色活细胞溶酶体的疗效请参考图2。
图2.Lyso-Green染色NRK-52E细胞(小鼠肾小管上皮细胞)的疗效图。33342染色的NRK-52E细胞其细胞核呈现红色萤光;Lyso-Green染色的NRK-52E细胞其溶酶体呈现红色萤光。
根据1:20,000的比列稀释细胞膜选择性通透,可以配制Lyso-Green工作液。
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