简介
细胞膜是细胞与外环境进行物质交换的屏障,是一种半透膜,即可选择性地控制物质进出细胞。
原理
细胞膜私密性测定实验的基本原理是若将红细胞放在低渗氨水中,因为细胞内的溶质含量低于细胞外,所以液体很快进入细胞内,使胞膜胀破,血红蛋白逸出,即发生溶血。若将红细胞放在各类等渗氨水中,红细胞膜对各类溶质分子的私密性不同,有的溶质分子可透入,有的则不能透入;虽然能透入,速率也各有差别。因而,当易透入的溶质分子步入红细胞,随胞内溶质分子含量降低,造成水份摄取,红细胞膨胀,细胞膜最终断裂出现溶血。此时,光线较容易通过碱液,原为不透明的红细胞悬液忽然弄成白色透明的血红蛋白氨水。按照溶质透入的速率不同,溶血时间也不同。为此,可通过检测溶血时间来恐怕细胞膜对各类物质私密性的大小。
材料与仪器
器材:
试管、试管架、记号笔、滴管、载片、盖片、镊子、滤纸、显微镜。
试剂:
①10%羊红细胞悬液(取10ml大鼠血加入到90ml生理盐水中混匀)
②兔红细胞悬液或大鼠红细胞悬液
③蒸馏水
④0.17mol/LNaCl碱液
⑤0.17mol/LNH4Cl碱液
⑥0.32mol/L猕猴桃糖碱液
⑦0.32mol/L甘油
⑧0.8mol/L乙醇碱液
⑨0.8mol/L丙三醇碱液
⑩氯仿

⑪M-缓冲液(吡啶(),3.404g;KCl,3.7g;MgCl2▪6H2O,101.65mg;ECTA,380.35mg;EDTA细胞膜选择性通透,29.224mg;吡啶丙酮细胞膜选择性通透,0.07ml;甘油,297ml;分馏水,加至1000ml。用1mol/LHC1调pH至7.2,温度保存)
⑫2%X-100碱液(量取2mlX-100(聚乙二醇辛基氰基醚)液,加M-缓冲液98ml即可。)
步骤
细胞膜私密性测定实验的基本过程可分为如下几步:
A轻轻振摇一下盛有制备好的羊血红细胞悬液的试管,观察悬液的特征,为一种不透明的白色液体。
B观察红细胞在低渗碱液中发生的溶血现象在1只试管中加入0.3ml红细胞悬液,再加入3ml分馏水,轻轻搅匀,注意观察碱液颜色的变化。可见碱液由不透明的白色(隔著它不能看见试管前面纸上的字)弄成蓝色澄清液(此时可清楚看见纸上的字),即已发生溶血。记录好时间。
C测定红细胞对各类物质的选择私密性取8只试管,分别加入0.17mol/L硫酸钠碱液、0.17mol/L硫酸铵碱液、0.32mol/L猕猴桃糖碱液、0.32mol/L甘油、0.8mol/L乙醇碱液、0.8mol/L丙三醇碱液、氯仿、2%X-100碱液各3ml,做出标记后,各管均加人红细胞悬液2滴,混匀后静放在温度中。
注意事项
试管要按照实验所要装的氨水种类来编号,吸管也要对应编号,请勿混淆,以保证实验结果的确切性。
