实验七亚细胞结构的观察-细胞骨架的观察真核细胞中纷繁复杂的纤维网架，称为细胞骨架（）。广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。狭义的细胞骨架是指细胞质骨架，包括：微丝（，MF，7nm）微管（，MT，25nm）中间纤维（，IF，10nm）细胞骨架（）细胞骨架的主要功能微丝（）微丝骨架是细胞内高度动态的结构,包括微丝的聚合、交联、成束及解聚等形态变化.在细胞执行各类运动功能或对外界刺迸发生反应时,微丝骨架经常通过迅速地聚合与解聚来调整与改变其形态结构,因而维持细胞正常生理活动的进行微丝骨架在维持细胞形态、参与细胞运动、胞质分裂和极性完善等细胞生理活动中饰演重要角色。G-actin、F-actin单体肌动蛋白（G-actin）和球状肌动蛋白（F-actin）的互相转变是微丝骨架的功能基础。肌动蛋白是微丝的结构成分，相对分子质量是4.3×104，有三种异构体，即α-actin、β-actin和γ-actin。
比较传统的模型觉得微丝是由两条肌动蛋白单链呈左手螺旋盘绕产生的纤维，近些年来有些学者觉得微丝是由一条肌动蛋白单体链产生的左手螺旋G---actinG-actin&F---、Mg2+、高K+、Na+Ca2+、低Na+、K+model微丝标记方式微丝标记分为在固定细胞中标记微丝和活体细胞中标记微丝。固定细胞中的微丝主要是用带萤光探针的抗原或鬼笔环肽标记，须要对样品进行物理固定和膜的通透。上皮细胞中的挠度纤维（微丝绿色、微管红色）（图片来自/）活体标记萤光类似物标记：指结合萤光探针的蛋白或氨基酸通过显微注射的方式转到细胞质中，参与微丝的组装或结合微丝因而突显细胞骨架的重建。GFP融合蛋白标记：GFP直接和肌动蛋白融合GFP和全长或截短的肌动蛋白结合蛋白（ABP）融合细胞骨架研究中常用抗生素抗生素名叫做用细胞松驰素B(B,CB)结合在微丝的正端，阻抑其聚合，同时提升临界含量细胞膜骨架，最终造成微丝的解聚鬼笔环肽()强烈亲和微丝，结合在微丝中actin亚单位之间，稳定微丝、促进微丝聚合秋水仙素（）阻断微管蛋白组装成微管紫杉酚（taxol）推动微管的装配，稳定已产生的微管实验原理(一)S.D.Pone用考马斯亮蓝染人皮肤成纤维细胞的细胞骨架获得成功。
1982年北京动物生理所陈梓卿采用动物细胞为材料也获成功。实践证明这是一种简单易行的方式。当细胞用适当含量的X-100氨水（聚乙二醇辛基氰基醚，一种非离子去垢剂）处理，才能溶化质膜结构中及细胞内许多蛋白质，而微丝束结合得比较紧密，不容易被消除，经固定和考马斯亮兰（非特异性蛋白质颜料）染色后，可在光镜下观察到由微丝组成的纤维束。实验原理(二)鬼笔环肽()是从一种毒性牛肝菌中分离的剧毒生物碱，它同细胞松驰素的作用相反,只与聚合的微丝结合,而不与肌动蛋白单体分子结合。它同聚合的微丝结合后,抑制了微丝的解体,从而破坏了微丝的聚合和解聚的动态平衡。因为鬼笔环肽特别特异地结合并稳定聚合态肌动蛋白,因此对肌动蛋白的动态平衡导致严重影响.据悉,较高含量的鬼笔环肽对细胞有残害作用.因而,用鬼笔环肽标记微丝并不是用于研究活体细胞的理想方式.实验目的把握细胞骨架的显示方式了解光镜下细胞骨架的基本形态结构材料和试剂材料：2BS人胚肺细胞、CHO中国猫咪子宫细胞、人肺炎A549细胞试剂：PEM缓冲液（50mMpipes（pH6.9）,5mMEGTA,5mMMgSO4,0.225M山梨醇），0.5%X-100（溶于PEM缓冲液），4%多聚甲醛（溶于PEM缓冲液）细胞膜骨架，0.2％考马斯亮蓝R250，55nMAlex-取出盖片，于小平皿中37℃预温PEM洗3次(每次1mL)2BS细胞、CHO、A549细胞培养于小盖玻片上（爬片）实验步骤X-100处理约10min(1mL)37℃预温PEM洗3次(每次1mL)37℃预温4%多聚甲醛固定细胞15min(1mL)37℃预温PEM洗数3次55nMAlex-10L湿盒中温度染色30min。
于小平皿中加入0.2％考马斯亮蓝R2501mL温度染色30min37℃预温PEM洗数3次每次10min萤光镜下观察用小磨片削去长圆形盖玻片的一角作为标记便于辨识细胞面。细胞密度60-80%注意盖玻片的正背面请勿形成气泡！在膜上加PEM，待盖玻片被冲起后，再轻轻揭下盖玻片。分馏水洗3-5遍镜下观察避光操作注意事项注意不要打碎盖片，分清细胞所在面；各步洗细胞要轻，勿使细胞开裂；萤光观察注意避光操作节省试剂。实验报告和思索题实验报告通过查找文献对实验结果进行剖析讨论。思索题PEM缓冲液的作用是哪些？1％X-100处理细胞的作用是哪些？考马斯R250和鬼笔环肽对细胞骨架的染色有哪些区别，各有哪些异同点？正常细胞和癌症细胞微丝骨架的区别