明视野显微镜是一种常见的显微镜检查方法,广泛应用于病理学和检查中观察染色切片。 所有显微镜都可以完成这个功能。
2.暗视野观察(Dark field DF)
暗场实际上是暗场照明。 其特点与明场不同。 它不直接观察照明光,而是观察被检查物体反射或衍射的光。 因此,视野变成黑暗的背景,而被检查的物体则呈现明亮的图像。
暗场的原理基于光学廷代尔现象。 当强光直接穿过灰尘时,人眼无法观察到。 这是由强光的衍射引起的。 如果你用光线倾斜地照射它,由于光的反射,颗粒的尺寸似乎会增加,使得它们对人眼可见。
暗场观察所需的特殊配件是暗场聚光镜。 其特点是不让光束从下往上穿过被检查物体,而是改变光路,使其斜向被检查物体偏光显微镜观察方法主要有哪些,使照明光不直接进入被检查物体。物镜,利用被检物体表面的反射或衍射光形成明亮的图像。 暗场观察的分辨率远高于明场观察,可达0.02-0.004
3. 相差显微镜(Phase PH)
在光学显微镜的发展过程中,相差显微镜的成功发明是现代显微技术的一项重要成就。我们知道,人眼只能辨别光波的波长(颜色)和振幅(亮度)。 对于无色透明的生物标本,光线通过时,波长和振幅变化不大,在明视场观察中很难观察到标本。
。 相衬显微镜是利用被检物体光路的差异进行显微检查,即有效利用光的干涉现象,将人眼无法区分的相位差转变为可区分的幅度差,即使对于无色透明物质。 可以变得清晰可见。 这极大地方便了活细胞的观察,因此相差显微镜广泛应用于倒置显微镜中。
相差显微镜的基本原理是将可见光透过标本的光程差转化为振幅差,从而提高各种结构之间的对比度,使各种结构清晰可见。 光线穿过标本后发生折射,偏离原来的光路,并被延迟1/4λ(波长)。 如果增加或减少1/4λ,则光程差变为1/2λ,两束光束合并后发生干涉。 加强、增加或减少振幅、增加对比度。 从结构上来说,相差显微镜有两个不同于普通光学显微镜的特殊之处:
1. 环形光阑 ( ) 位于光源和聚光镜之间。 其作用是使通过聚光镜的光线形成空心光锥并聚焦在标本上。
2、相位板( ) 在物镜上添加了涂有氟化镁的相位板,可以使直射光或衍射光的相位延迟1/4λ。 分为两种:
1. A+相位板:将直射光延迟1/4λ。 两组光波合成后,光波相加,振幅增大。 标本结构变得比周围介质更亮,形成明亮对比度(或负对比度)。
2. B+相位板:使衍射光延迟1/4λ。 两组光线组合后,光波相减,振幅变小,形成暗对比(或正对比),结构变得比周围介质更暗。
4. 微分干涉显微镜(DIC)
微分干涉显微镜出现于 20 世纪 60 年代。 它不仅可以观察无色透明的物体,而且图像呈现出强烈的立体浮雕感。 它还具有相差显微镜无法达到的某些优点,观察效果更好。 逼真。
原则;
微分干涉显微镜使用特殊的沃拉斯顿棱镜来分解光束。 分裂梁的振动方向相互垂直且强度相等。 光束在彼此非常接近的两个点处穿过被检查的物体,但相位略有不同。 由于两束光束之间的分光距离极小,因此不会出现重影现象,使图像呈现三维效果。
DIC显微镜的物理原理与相差显微镜完全不同,技术设计也复杂得多。 DIC使用偏振光,有四个特殊的光学元件:起偏器()、DIC棱镜、DIC滑翔机和检偏器()。 起偏器直接安装在聚光系统前面,使光线发生线偏振。 罗马斯棱镜或 DIC 棱镜安装在聚光镜中。 这种棱镜可以将一束光分解成两束偏振方向不同的光(x和y),并且两者形成一个小角度。 聚光镜使两束光束平行于显微镜的光轴。 最初,两束光具有相同的相位。 在穿过试样的相邻区域后,由于试样的厚度和折射率不同,两束光之间会产生光程差。 第二个罗马棱镜,即 DIC 滑翔机,安装在物镜的后焦平面上,它将两种光波合二为一。
此时,两束光的偏振面(x和y)仍然存在。 最后,光束穿过第二个偏振装置,即检偏器。 在光束在目镜中形成 DIC 图像之前,检偏器与偏振器成直角。 分析器将两个垂直的光波组合成具有相同偏振平面的两束光束,使它们发生干涉。 x 波和 y 波之间的光程差决定了传输的光量。 当光程差为0时,没有光通过检偏器; 当光程差等于波长的一半时偏光显微镜观察方法主要有哪些,通过的光达到最大值。 所以在灰色背景下,标本结构呈现出明暗差异。 为了达到图像的最佳对比度,可以通过调节DIC滑块的纵向微调来改变光程差。 光程差可以改变图像的亮度。调节DIC滑块可以使标本的细微结构呈现出正或负的投影图像,通常一侧亮,另一侧暗。 这会产生标本的人造三维印象,类似于大理石上的浮雕。
5.偏光显微镜(POL)
偏光显微镜的特点
偏光显微镜是用来鉴定物质精细结构光学性质的显微镜。 任何具有双折射的物质都可以在偏光显微镜下清晰地区分。 当然,这些物质也可以用染过的头发观察到,但有些是不可能的,必须使用偏光显微镜。
偏光显微镜的特点是将普通光转变为偏振光进行显微镜检查,以鉴定某种物质是单折射(各向同性)还是双折射(各向异性)。
双折射是晶体的基本性质。 因此,偏光显微镜广泛应用于矿物、化学等领域。 它在生物学和植物学中也有应用。
6. 浮雕相差显微镜(RC HMC)
1975年,博士发明
2002年,专利到期,各显微镜制造商推出了采用RC技术的以自己命名的产品。
原则
斜光照射标本产生折射和衍射。 光线通过物镜的光密度梯度调节器产生不同的阴影,从而在透明标本表面产生明暗差异,增加观察对比度。
特征
提高未染色标本的可见度和对比度;
图像显示阴影或近似三维结构,无光晕;
可检测双折射材料(岩片、晶体、骨头);
可检测玻璃、塑料等培养皿中的细胞、器官和组织;
聚光镜的工作距离可以设计得更长;
RC 物镜还可用于明场、暗场和荧光观察
7:荧光显微镜(FL)
荧光显微镜利用短波长光照射被荧光素染色的物体,使其被激发产生长波长荧光,然后进行观察。
优势:
• 高检测能力(放大)
• 对细胞刺激小(可体内染色)
• 能够进行多次染色
使用:
• 观察物体结构——荧光素
• 比较荧光的有无和色调来识别物质 - 抗体荧光等。
• 测量荧光量以进行物质的定性和定量分析