膜片钳全细胞模式
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1976年西班牙马普生物化学研究所Neher和创建了膜片钳技术(patchclamp)。这是一种以记录通过离子通道的离子电压来反映细胞膜单一的或多个的离子通道分子活动的技术。它和基因克隆技术(gene)并架齐驱,给生命科学研究带来了巨大的前进动力。
在倒置显微镜下细胞膜片,让微电极逐渐紧靠细胞,当微电极与细胞接触时,给微电极一个很小的负压,产生吉欧封接,之后再给微电极管里一个很小的负压,致使电极覆盖下的细胞膜断裂,因而促使电极液和细胞内液想通,而和浴室里的氨水绝缘,产生了全细胞模式。全细胞模式不是记录小片膜的离子电压,而是记录全细胞的离子电压。虽然电极里的膜片被吸破,但是微电极和细胞封接的阻抗很高,这是保持全细胞记录的重要条件。
用抗生素或则毒素等非生理智成份更换掉电极内液,对电流依赖性通道由于抗生素而遭到哪些影响而进行研究。因而在通道开关动力学,对抗生素作用的功能机制在微观水平上进行研究。还能否对内外液的含量成份进行任意的改变,来对各组分对膜私密性的影响进行研究,尤其是氢离子和钙离子的含量要适当。也可以在膜受体相应地使用兴奋剂,在对离子通道电压流动的检测过程中,对经G蛋白介导的第二信使作用进行了解,对跨膜信息转导进行研究。
全细胞模式中,电极内液和细胞内液扩散混和除了会促使细胞内液的成份发生变化进而造成细胞的电变化遭到影响,并且还常常让全细胞记录发生rundown现象。为了避免此情况的发生,须要用穿孔膜片钳法(patch),就是在微电极中充灌制霉菌素()和二性霉素(),和细胞膜中的甾体形成反应后,生成了较大颗粒不能否通过并且一价离子容许通过的小孔,这种小孔导电,对所记录的电压不会形成影响,和二性霉素相比,制霉菌素有愈发好的疗效。
2005-04-28浏览次数:1534次
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热门标签:膜片钳与其他技术的结合使用以及实验中的常用术语膜片钳离子通道的生理功能和特点
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