给大家分享一些食品医院复试时可能会问到的微生物实验的相关原理和操作。 请注意，“仅供参考，因为很可能未经测试。”
使用普通显微镜、观察细菌形态的目的是为了学习和掌握油镜的原理和使用方法。
复习光学显微镜各部分的结构、功能和用途。
原则
微生物最显着的特点是它们很小，它们的个体形态和细胞结构必须借助显微镜来观察。 熟悉显微镜并掌握其操作技术是研究微生物不可或缺的手段。 本实验将介绍当前微生物研究中最常用的普通光学显微镜的结构和样品制备。 目的是让学生通过实验对光学显微镜有一个全面的了解，并重点掌握油镜在明视场普通光学显微镜中的使用。
材料应变
金黄色葡萄球菌 () 和枯草芽孢杆菌 () 对载玻片标本进行染色。 链霉菌 () 和青霉菌 () 的水封玻片。
溶液或试剂：雪松油、二甲苯。
仪器或其他设备、显微镜、擦镜纸等
过程
安装光源，调整目镜，调整聚光镜、低倍镜和高倍镜，清洁并恢复油镜。
步骤观察前的准备
1.1. 显微镜放置
将显微镜放置在平坦的实验台上，镜座距实验台边缘约10cm。 镜检时姿势应正确。
1.2. 光源调节
安装在镜架内的光源灯可以通过调节电压获得合适的照明亮度。 如果采用反射镜收集自然光或灯光作为照明光源，则应根据光源的强度和所用物镜的放大倍数来选择凹面或凸面反射镜。 调整其角度，使视野内光线均匀，亮度合适。
1.3. 双目显微镜目镜调节
根据使用者的个人情况，可以适当调节双目显微镜的目镜之间的距离，左目镜一般都配有屈光度调节环，可以适应不同观察者不同眼距或视力差异的情况。两只眼睛。
1.4. 聚光镜数值孔径值的调整只有正确使用聚光镜，才能提高显微检查的效果。 聚光镜的主要参数是数值孔径，它有一定的可变范围。 一般情况下，聚光镜边框上的数字代表其最大数值孔径。 通过调节聚光镜下可变光阑的开度，可以获得各种数值孔径，以适应不同物镜的需要。
显微镜观察
在目镜不变的情况下，使用不同倍率的物镜所能达到的分辨率和放大倍数是不同的。 一般情况下，尤其是初学者在进行显微观察时，应遵循从小倍镜到高倍镜再到油镜的观察程序，因为低倍物镜的视场比较大，使得轻松找到目标并确定检查位置。
2.1. 低倍观察
将金黄色葡萄球菌染色的标本载玻片置于载物台上，用标本夹夹住，移动螺旋桨偏光显微镜的使用方法，使观察物体位于物镜正下方。 降低 10 倍物镜，使其靠近标本。 使用粗调器缓慢升起镜筒，使标本最初聚焦在视野中。 然后用微调器将图像调整到清晰。 通过载玻片夹推动器缓慢移动载玻片，仔细观察标本的各个部分，找到合适的目标物体，仔细观察并记录观察结果。
2.2 高倍观察
在低倍镜下找到合适的观察目标并将其移至视场中心后，将高倍镜移至工作位置。 适当调整聚光镜孔径和视场亮度后，再微调微调器，使物像清晰。 利用螺旋桨移动标本找到需要观察的部位偏光显微镜的使用方法，移至视场中心仔细观察或准备用油镜观察。
2.3 油镜观察 在高倍镜或低倍镜下找到待观察的样品区域后，用粗调器升起镜筒，然后将油镜转到工作位置。 在待观察的样品区域滴一滴雪松油，从侧面观察，用粗调器小心地降低镜筒，使油镜浸入油中，直至几乎与标本接触（注意：不要将油镜片压下去，否则不仅会压碎玻璃还会损坏镜片）。 将聚光器升到最高位置，打开光圈（如果所用聚光器的数值孔径值超过1.0，还应在聚光器与滑道之间加入一滴雪松油，以保证达到最大效率），调节确保视野的亮度与照明相适应。 使用粗调器缓慢抬起镜筒，直至视野中出现物像，然后使用微调器使其清晰对焦。
显微镜的使用后处理：抬起镜筒并取出载玻片。 使用镜头纸清洁其他物镜和目镜，使用丝布清洁显微镜的金属部件。 将所有部件复原，使反射镜与镜座垂直，将物镜转成“八”字形，然后向下转动。 同时放下聚光镜，避免物镜与聚光镜碰撞，盖上镜头盖，放回原位。
结果
画出分别在低倍、高倍和油镜下观察到的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、链霉菌和青霉菌的形态，包括三种条件下视场的变化，并标明物镜的放大倍数。 倍数和总放大倍数。
使用油镜观察时应注意哪些问题？ 载玻片和镜片之间应该加什么油？ 它的作用是什么？
答：先用擦镜纸清洁镜片，防止上次实验污染。 添加雪松油可以提高折射率，这意味着提高显微镜的分辨率。
使用高倍镜片、油镜片时为什么要特别注意避免粗调器误操作？
答：使用高倍镜和油镜时，镜片离标本越近，粗调器的调节范围就越大。 粗调器误操作会导致镜片向标本方向大幅度移动，很容易损坏标本和镜片。 一般情况下，首先使用低倍率镜头寻找物像，然后切换至高倍率镜头。 那么你只需要使用微调器即可。
什么是物镜的共焦现象？ 它在显微镜观察中有什么意义？
答：共焦现象是指物像在一个物镜中清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置观察时，物像基本保持在焦点上。 这种现象称为物镜的共焦（）。 利用这种共焦现象，当使用高倍物镜时，我们可以先用低倍物镜调整焦距，然后再切换到高倍物镜。 这就保证了当使用高倍率、短工作距离的物镜，如高倍镜或油镜时，仅用微调器就可以清晰地聚焦物像，从而避免镜头损坏或造成损坏。使用粗调器时可能发生的误操作。 幻灯片。 同时，由于低倍物镜的视场远高于高倍物镜，更有利于寻找观察物体的位置。 （即转换倍率时，无需再次调整焦距）
影响显微镜分辨率的因素有哪些？
答：显微镜的分辨率是由物镜决定的。 分辨率与波长和物镜的数值孔径有关。 减小波长和增大数值孔径可以提高显微镜的分辨率。 分辨率决定了位图图像的细节程度。
结合实验经验，谈谈如何根据被观察微生物的大小，选择不同的物镜进行有效观察。
答：对于细菌使用油镜，对于真菌使用高倍镜。 先用低倍镜寻找目标，然后用高倍镜调整到合适的视野和合适的清晰度。
备注（显微镜的基本结构和使用说明书）
普通光学显微镜使用两个透镜系统：目镜和物镜来放大图像。 它们由两大部分组成：机械装置和光学系统。 显微镜的光学系统包括四个部件：物镜、目镜、反射镜和聚光镜。 其中，物镜的性能最为关键，它直接影响显微镜的分辨率。
显微镜结构示意图（1目镜2镜筒3转换器4物镜5载物台6聚光器7虹彩光阑8反射镜9镜座10粗调螺丝11微调螺丝12镜臂）
一般微生物学使用的显微镜有三种物镜，即低倍镜（4×~10×）、高倍镜（40×~45×）和油镜（90×-100×），它们是对于微生物学研究最重要。 使用油镜时，需要在载玻片和镜片之间滴几滴雪松油。 一方面，它增加了照明的亮度。 油透镜放大倍数大、焦距短、直径小，但需要的光强度最大。 由于介质的密度不同（从玻璃进入空气，然后进入物镜），从承载标本的载玻片透射的部分光线因折射或全反射而无法进入物镜。 因此，使用油透镜时，光线不会进入透镜。 进入的光线较少，物体图像显得不清晰。 为了减少通过光的损失，在使用油透镜时，必须在油透镜之间添加与玻璃折射率（n=1.55）相似的透镜油（通常是折射率n=1.52的雪松油）和玻璃。 另一方面是提高显微镜的分辨率。 显微镜的分辨率或倍率是指显微镜区分两点之间最小距离的能力。 显微镜的质量主要取决于分辨率（D:）的大小：
分辨率最大可分辨距离（ ）
式中，λ=光波波长； NA = 物镜的数值孔径值。 光学显微镜的光源不能超过可见光的波长范围（0.4~0.7μm），数值孔径值取决于物镜的透镜角度以及载玻片与透镜之间介质的折射率，可表示为： NA= n.sin α 。 其中α是光最大入射角的一半。 这取决于物镜的直径和焦距。 一般来说，在实际应用中，最大只能达到120°，n为介质的折射率。 由于杉木油的折射率 (1.52) 高于空气和水的折射率 (分别为 1.0 和 1.33)，因此使用杉木油作为镜头和玻璃之间介质的油透镜的数值孔径 (NA)一般可以达到1.2~1.4之间），高于低倍物镜和高倍物镜（NA低于1.0）。 如果按照可见光平均波长0.55μm计算，通常数值孔径在0.65左右的高倍镜只能分辨不小于0.4μm距离的物体，而油镜的分辨率可达约0.2微米。 大多数细菌的直径都在0.5um以上，因此油镜可以更好地看到细菌的个体形状。
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