我们知道，尿液有形成分的检查离不开显微镜的应用。 自从广泛使用显微镜技术检查尿液以来，尿液形态学的研究取得了显着进展。
现代高端多功能显微镜往往配备不同的组件来处理我们需要研究和识别的组件，这样我们就可以通过切换不同的光源组件进行照明来达到在同一视场中观察和识别的目的。
本文介绍了尿液有形成分检查中常用的几种照明技术，以便大家学习和了解，充分发挥显微镜的特殊功能。
明场
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显微镜
我们通常使用的显微镜照明技术是明场，但我们可以将其称为光学显微镜。 光学显微镜采用明场照明（-field）技术（图1），这是最简单的技术方法，适用于所有显微镜。 这是我们最常用的光学显微镜技术。
在这项技术中，光源发出的所有光都会穿过聚光镜并聚焦在样本上，在明亮的背景下形成暗图像。 要使用此方法，显微镜下方的聚光镜转塔应设置为“0”或“BF”模式。
暗场
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显微镜
检测专业领域中所指的暗视野显微镜采用的是暗视野照明技术（图2），大多数显微镜上也具备这种技术。 多功能显微镜下的聚光镜内安装有不透明暗视野圆盘。 片。
在此模式下，只有来自光源的外围光聚焦在样品上，在黑暗背景下产生明亮的图像。 高折射率沉淀物中的晶体和脂质等成分在暗场照明条件下显得特别“明亮”。 要使用暗场功能，聚光镜转盘应设置为“DF”模式。
相位差
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显微镜
如果显微镜具有相差（Phase）功能，则通过使用聚光镜中的“相位环（“phase”）和物镜中的反向“相位板”来改变光路（图3）。
此效果增强了对象边缘和低折射率元素（例如铸件中的透明蛋白基质）的对比度。 这种成像方法需要配备特殊聚光镜和特殊相衬物镜的显微镜。 根据所使用的物镜，只需将聚光镜上的转换转盘设置为“Ph1、Ph2或Ph3”模式即可。
偏振光
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显微镜
在使用偏光显微镜时（图 4），一个偏光滤光器（偏振器）放置在聚光镜下方偏光显微镜的使用，另一个（偏光器）放置在样品上方的光路中（通常在物镜和观察镜头之间的特定空间中）。 位置插入）。 当位于下聚光镜上的偏光镜片相对于上面插入的偏光镜片旋转时，旋转90°时，所有偏光都被阻挡，图像背景看起来很暗。 光穿过载玻片上的各种折射物体（例如脂质、晶体和各种干扰成分）时会表现出双折射，这意味着光在两个方向上发生折射。 显微镜的光学器件能够分析额外的折射光，从而在黑暗的背景下形成对比鲜明的物体。
换句话说，图像对比度是通过平面偏振光与双折射样本相互作用产生的，产生两个独立的波分量偏光显微镜的使用，每个波分量在相互垂直的平面上偏振。
所有这些的使用方式通常有助于观察。
例如（图5）在光学显微镜视场图像的左上角，我们看到一个圆形双凹图像。 在右上图像的视场图像中，我们注意到这些物体具有高折射率，这意味着它们看起来相当明亮（典型的脂质或晶体）。
在左下角的相差图像中，我们注意到材料实际上被暗影包围。 铸型蛋白基质在光学显微镜下不可见，但在相差视觉下明显。 我们现在看到的是铸件内的椭圆形内含物，但我们还不确定这些内含物是什么。 它们可能是红细胞、脂滴、晶体等，但在右下角的偏光视野下，我们看到这些包涵体是双折射的，所以肯定是晶体。
因此，我们知道，在最初的光学显微镜视野图像中可能不明显的是铸件中的一水草酸钙晶体。 借助多功能显微镜方法，发现和识别此类晶体铸件将变得更加容易。 。
通过偏光显微镜可以轻松识别脂质、晶体和污染物（例如淀粉和合成纤维）。 某些脂质显示出特征性的“马耳他十字”图案，该图案可用于识别尿液中的脂质（图 6）。
概括
经验告诉我们，相衬镜可提供对比度和分辨率的最佳平衡，并且没有染色沉淀的薄切片可产生最高分辨率的图像。 对于染色的标本或非常致密的沉积物，相衬对比结果不是很好，染色还会导致对比度异常降低。
暗视野可用于以低功率扫描载玻片上的尿液形成成分，从而轻松识别管型、脂质和晶体。 当相差显微镜的对比度不可用时，它也有助于在高放大倍数下识别棘细胞。
偏振光可让您验证脂质的存在，并帮助识别晶体和外来污染物。
作为日常工作流程的一部分，请记住调整聚光镜焦距和视场孔径，将光源精确聚焦在所观察样本的平面上，消除无关光干扰，并选择和使用正确的聚光镜转塔设置以获得所需的照明图案。 。
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来源 | 检验医学
编辑| 罗秉汉
