单位：四川大学华西公共卫生学院/四川大学华西第四医院检验科
在临床微生物检测中，我们经常需要对细菌进行计数。细菌数量的测定方法有很多种，不同的细菌计数方法采用的计数单位也不同。我们常见的细菌计数单位有/ml、mcf、cfu/ml、ccu/ml。这些计数单位的含义以及所采用的计数方法，你都了解吗？
1.件/毫升
个/毫升是指每毫升标本中所含细菌的数量，以个/毫升作为细菌计数单位的细菌计数法为计数器法。
1.1细菌计数板：细菌计数板与血细胞计数板的原理及组成相同，只不过细菌计数板较薄，可以用油镜观察；而血细胞计数板较厚，不能用油镜观察，且计数板底部的细菌难以看清[1]。
取一定体积的样品菌悬液置于细菌计数板的计数池中，在显微镜下观察计数。由于计数池的体积是一定的（0.02mm3），所以可根据计数器刻度的细菌数计算出样品中的细菌数。此法简便易行，可立即得到结果。大的酵母菌或霉菌孢子也可使用血球计数板进行计数。
1.2 电子计数器：电子计数器的工作原理与血细胞分析仪相似，测量小孔中液体电阻的变化。小孔只能通过一个细菌。当一个细菌通过这个小孔时，电阻会显著增加，形成脉冲，并自动记录在电子记录装置上[2]。这种方法测量结果更准确，但它只识别颗粒的大小，无法区分是否是细菌。因此，要求细菌悬液中不含碎屑。
2.mcf
mcf为麦克法兰浊度单位。人们发明了用于微生物浊度测定的不同浊度的标准浊度管，具体配制方法根据硫酸与氯化钡的配比决定，见表[3]。当0.5 ml氯化钡（1.17%）加入99.5 ml硫酸（1%）中时，所得溶液的浊度为0.5麦克法兰单位。0.5麦克法兰浓度菌液是临床微生物药敏试验中常用的浓度，一般认为，将配制好的菌液浓度配制成0.5麦克法兰浊度管时，相当于1.5×108个细菌/ml。以mcf为细菌计数单位的细菌计数方法即为比浊法。
2.1 麦克法兰比浊管：可自行配制麦克法兰比浊管，也可购买市售标准麦克法兰比浊管，将配制的菌悬液与0.5麦克法兰浊度的标准麦克法兰比浊管进行比较ml是什么，若浊度相同，则说明菌悬液浓度为0.5麦克法兰。此方法用肉眼观察浊度，误差较大。
2.2 麦克法兰浊度仪：麦克法兰浊度仪是采用麦克法兰浊度法测定的自动化分析仪器，凭借其灵敏、准确、快速等优点，已逐渐取代手工法，成为细菌浊度测定的主要工具。麦克法兰浊度仪测量细菌溶液样品，直接显示麦克法兰单位浊度值。根据国际通用的麦克法兰单位浊度值与细菌数的关系，可计算出细菌浓度[4]。浊度法简便、快速，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，并得到细菌的相对数，不能用于测量颜色过深的样品。
2.3 分光光度计：一般实验室都有分光光度计，可以测量细菌悬液的浊度。按照美国CLSI（原NCCLS）推荐的方法，将细菌悬液调节到OD（625）值在0.08~0.13之间，相当于浊度为0.5[5]。但由于不同细菌的折射率不同，这只是一个粗略的换算关系，只具有一定的参考价值。
使用麦克法兰浊度计和分光光度计进行细菌计数的优点是简单、快速、可连续测量，适合自动化检测。但由于光密度或透光率受细菌浓度以外的因素影响，例如细菌细胞大小、形态、培养液成分和所用光的波长，因此浊度法仅是一种相对粗略的测量细菌总数的方法。
3.菌落形成单位/毫升
CFU即菌落形成单位，是指单个细菌或多个细菌聚集成簇，在固体培养基上生长繁殖所形成的菌落，称为菌落形成单位，是计算细菌或真菌数量的单位[6]。CFU/mL是指每毫升样品中所含的细菌菌落总数。菌落形成单位的计数方法与前面两种计数方法不同，前面两种方法既计算活菌，也计算死菌，而CFU只计算活菌。以CFU/mL为细菌计数单位的细菌计数方法是平板菌落计数法（CFU法）。
平板菌落计数法：取一定体积的菌悬液，做若干个不同的10倍递增稀释度，然后从每个稀释度中取1ml置于无菌平皿中，与营养琼脂培养基混合，在一定温度下培养一定时间（一般为48小时）后，记录每皿形成的菌落数。根据稀释倍数，计算出每毫升原始样本中所含的细菌菌落总数[7]。此法灵敏度高，是临床微生物学检验中最常用的活菌计数方法。
4. 立方厘米/毫升
CCU是颜色变化单位，是根据培养基中微生物的代谢活动和培养基颜色的变化来计数培养基中微生物数量的单位[8]。以CCU/ml为细菌计数单位的细菌计数法称为CCU法。
CCU法通常用于一般比浊法无法计数的极微小的微生物ml是什么，如支原体。由于支原体的液体培养物完全透明，呈现清澈透明的红色，所以不能用比浊法计数。由于支原体固体培养困难，不易用CFU法计数，所以需要采用特殊的计数方法，即CCU法。
下面以解脲支原体为例，简单介绍一下操作过程[9]：
1. 取12支无菌试管，每支试管装入1.8毫升解脲支原体培养基。
2. 在第一管中加入0.2 ml解脲支原体溶液，充分混匀，再吸取0.2 ml于第二管中，依此类推，做10倍梯度稀释，直至最后一管。
3、37℃培养，取最后一管培养基变色，即为受试菌液的CCU，即支原体的最大代谢活性，如第六管变色，则其相对浓度为10的6次方CCU/ml，即10^6CCU/ml。
一般来说，比浊法和菌落计数法对于大多数细菌的计数都可以满足要求，但对于支原体等比较特殊的微生物，CCU法更为合适。
临床细菌计数方法有很多，各有优缺点，并不是所有方法都适用。临床微生物检测中，常用的是平板菌落计数法和比浊法。至于哪种方法更适合您，则取决于您的具体情况和检测目的。
【参考】
[1] 韩翠翠. 显微镜直接计数法与稀释板法分析[J]. 实验教学与仪器, 2016, 33(01): 32-34.
[2] 郑万强. 细菌培养新进展[J]. 中国现代医生, 2009, 47(30): 6-7+29.
[3] 张彩萍. 分枝杆菌Hsp65基因PCR-RFLP三种凝胶电泳方法的比较研究及临床应用[D]. 北京协和医学院, 2009.
[4] 万涛.基于麦克法兰比浊法原理的细菌浊度仪校准方法探讨[J].计量测试技术，2018,45(07):117-119.
[5] 余柏增. 5种碳青霉烯酶基因多重PCR技术的建立及临床应用[D]. 南方医科大学，2020.
[6] 葛婷婷. 肝脓肿DWI改变及其与大肠杆菌相关性研究[D]. 上海交通大学, 2017.
[7] 徐雷瑞, 付普博, 王琪, 李丹, 马丹, 陶文静, 曲连海, 贾晨, 曾静. 试纸条法在食品中菌落总数检测中的应用[J]. 食品安全质量学报, 2021, 12(02): 472-478.
[8]王玉梅,李二华,曾凌峰,刘燕,高尚先. 人脲原体核酸检测试剂盒国家标准物质的研制[J]. 中国生物制品学杂志, 2014, 27(08): 1042-1047.
[9] 郑秉杰. BALB/c小鼠生殖道支原体流行病学研究及下生殖道感染模型的建立[D]. 北京协和医学院, 2014.